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Co-ip染色质免疫共沉淀放大图片

产品价格:1   元(人民币)
上架日期:2015年5月22日
产地:本地
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浙江良达阀门有限公司

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品牌:基尔顿产地:本地
价格:1人民币/件规格:完善

简要说明:基尔顿牌的Co-ip染色质免疫共沉淀产品:估价:1,规格:完善,产品系列编号:齐全

详细介绍:

  

Co-ip染色质免疫共沉淀的详细资料: 

Co-ip染色质免疫共沉淀简单介绍:

    Co-ip染色质免疫共沉淀:Co-ip染色质免疫共沉淀技术主要应用于验证及探寻体内环境中,蛋白质和DNA的直接相互作用,旨在探索特定蛋白质在DNA上的特定结合序列,常在研究转录调控以及组蛋白修饰中被应用到。

 实验过程大致为:交联-解交联-超声打碎-免疫沉淀-洗涤-DNA纯化-PCR检测。

Co-ip染色质免疫共沉淀具体操作:

样品准备:培养细胞(若样品为组织,可先培养原代细胞);固定,或者直接活细胞送样。

细胞固定:此步骤目的为将结合在DNA上的蛋白用共价形式交联在所结合的位点上,避免在之后的操作步骤中脱离丢失。直接将甲醛加入细胞培养液,摇晃固定10分钟后,迅速加入2.5M甘氨酸解交联5分钟,PBS洗涤,刮下细胞。

超声打碎:此步骤目的为将长链的DNA打碎成200-1000bpDNA。使用设备是超声水浴锅,EP管在冰水混合物中超声,超声后细胞悬液变得澄清透明。离心取上清。

免疫沉淀:此步骤是加入特异性抗体和对照IgG,和结合抗体的磁珠(或protein A/G)。经稀释后,超声产物分成两份,分别加入特异性抗体和对照IgG,轮转过液,第二天加入磁珠轮转4小时。

洗涤:此步骤是减少非特异性结合。分别用稀释缓冲液、低盐溶液、高盐溶液、氯化锂溶液以及TE缓冲液洗涤共7次。用洗脱缓冲液在65℃洗脱过液。

DNA纯化:将洗脱的产物用DNA纯化试剂盒纯化,得到50ul纯化产物,用于检测ChIP结果。

更多Co-ip染色质免疫共沉淀请关注:www.jrdbio.com 

其他产品:Chip染色质免疫共沉淀 http://www.jrdbio.com/jrdunbio2015-SonList-1139712/

 


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