详细介绍:
Chip原理的详细资料:
Chip原理实验操作流程:
1 、Chip原理样品准备与交联
细胞收集后,用37%的formaldehyde处理细胞,交联核酸与DNA结合蛋白;
2. Chip原理超声打断染色质
裂解细胞,用Bioruptor将染色质超声破碎成200-1000bp片断;将片段分为两份,一份用于免疫共沉淀,一份用于对照。
3 、Chip原理免疫共沉淀 (IP)
取B步骤所得一份片断与ChIP特异抗体结合进行免疫共沉淀,利用免疫磁珠法富集抗体复合物。
4 、Chip原理解交联及纯化 DNA
将富集的DNA/蛋白复合物解交联释放DNA,并进行纯化(IP DNA);B步骤所得用于对照(Input DNA)的片断作不进行IP实验,但也要解交联并纯化。
5 、 Chip原理DNA 段 PCR 扩增
针对ChIP DNA, Input DNA及对照DNA的目的片段设计特异性引物并进行荧光定量PCR扩增。
6 、Chip原理结果分析
%Input=2(CtInput-CtChIP)×Fd×100%
Fold Enrichment = [%(ChIP/Input)] / [%( control/Input)]
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