大鼠高敏甲状腺素(U-T4)elisa试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

药品名称：

通用名：大鼠高敏甲状腺素(U-T4)酶联免疫分析试剂盒

使用目的：

本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中高敏甲状腺素(U-T4)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠高敏甲状腺素(U-T4)水平。用纯化的大鼠高敏甲状腺素(U-T4)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入高敏甲状腺素(U-T4)再与HRP标记的U-T4抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的高敏甲状腺素(U-T4)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中大鼠高敏甲状腺素(U-T4)浓度。

试剂盒组成

120倍浓缩洗涤液30ml×1瓶7终止液6ml×1瓶

2酶标试剂6ml×1瓶8标准品(18pmol/L)0.5ml×1瓶

3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶

4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份

5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张

6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个

标本要求

1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在*、第二孔中分别加标准品100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为12pmol/L，8pmol/L，4pmol/L，2pmol/L，1pmol/L)。

2.加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4.请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释定倍数(n倍)后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5.封板膜只限次性使用，以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

大鼠高敏甲状腺素(U-T4)ELISA试剂盒使用说明书

检测范围：

0.7pmol/L-15pmol/L

规格：

96人份/盒

保存条件及有效期

1.试剂盒保存：;2-8℃。

2.有效期：6个月